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常見的SCPCL-5妥爾油脂肪酸

作者:[195p4r] 發(fā)布時間:[2024-05-17 23:59:23]

常見的SCPCL-5妥爾油脂肪酸,粗妥爾油(CTO)是硫酸鹽制法制漿廠的副產(chǎn)品。

編碼感興趣的特定分離的多肽的多核苷酸序列將被插入表達(dá)載體中并且任選地被可操作地連接至表達(dá)控制序列上,該表達(dá)控制序列適于在希望的宿主中表達(dá)該蛋白質(zhì)??梢酝ㄟ^核苷酸測序、限制性酶切作圖和生物活性多肽在適合的宿主內(nèi)的表達(dá)來確認(rèn)適當(dāng)?shù)慕M裝。如本領(lǐng)域所熟知的,為了在宿主中獲得轉(zhuǎn)染的高表達(dá)水平,可以將該可操作地連接至轉(zhuǎn)錄和翻譯表達(dá)控制序列上,這些序列在所選的表達(dá)宿主中具有功能性。重組表達(dá)載體可以用于擴(kuò)增和表達(dá)編碼特異性新生抗原肽的dna。重組表達(dá)載體是可復(fù)制的dna構(gòu)建體,它們具有編碼特異性新生抗原肽或生物等價類似物的合成或cdna衍生的dna片段,這些dna片段被可操作地連接至適合的轉(zhuǎn)錄或翻譯調(diào)節(jié)元件上,這些調(diào)節(jié)元件來源于哺乳動物、微生物、病毒或昆蟲。

在表達(dá)中具有調(diào)節(jié)作用的一種或多種遺傳元件,例如,轉(zhuǎn)錄啟動子或增強(qiáng)子;被轉(zhuǎn)錄成mrna并被翻譯成蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)或編碼序列;適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄和翻譯起始和終止序列,如下文所詳述的。這樣的調(diào)節(jié)元件可以包括用于控制轉(zhuǎn)錄的操縱子序列??梢粤硗鈸饺胪ǔYx予在宿主中進(jìn)行復(fù)制的能力的復(fù)制起點以及有助于識別轉(zhuǎn)化體的選擇。當(dāng)dna區(qū)域在功能上彼此相關(guān)時,將它們可操作地連接。的dna可操作地連接至多肽的dna,如果它被表達(dá)為參與多肽的分泌的前體的話;

表達(dá)控制序列和表達(dá)載體的選擇將取決于宿主的選擇。可以使用多種多樣的表達(dá)宿主/載體組合。用于真核宿主的有用的表達(dá)載體包括例如包括來自sv牛乳頭瘤病毒、腺病毒和巨細(xì)胞病毒的表達(dá)控制序列的載體。用于細(xì)菌宿主的有用的表達(dá)載體包括已知的細(xì)菌質(zhì)粒,諸如來自大腸桿菌的質(zhì)粒包括pcr pbrpmb9及其衍生物,更寬的宿主范圍質(zhì)粒諸如m13和絲狀單鏈dna噬菌體。用于表達(dá)多肽的合適的宿主細(xì)胞包括處于適當(dāng)?shù)膯幼拥目刂葡碌脑松?、酵母、昆蟲或高等真核細(xì)胞。

高等真核細(xì)胞包括建立的哺乳動物來源的細(xì)胞系。還可以利用無細(xì)胞翻譯系統(tǒng)。還有利地利用各種哺乳動物或昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)來表達(dá)重組蛋白。

可以進(jìn)行哺乳動物細(xì)胞中的重組蛋白的表達(dá),因為這樣的蛋白質(zhì)通常被正確折疊,適當(dāng)修飾并且具有功能性。hela以及bhk細(xì)胞系。哺乳動物表達(dá)載體可以包括非轉(zhuǎn)錄元件諸如復(fù)制起點、連接至待表達(dá)的上的合適的啟動子和增強(qiáng)子以及其他5’或3’側(cè)翼非轉(zhuǎn)錄序列和5’或3’非翻譯序列,諸如必要的核糖體結(jié)合位點、聚腺苷酸化位點、剪接供體和受體位點以及轉(zhuǎn)錄終止序列??梢愿鶕?jù)任何合適的方法純化由轉(zhuǎn)化宿主產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。離心、差別溶解度或通過用于蛋白質(zhì)純化的任何其他標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。轉(zhuǎn)移酶等可以附接至蛋白質(zhì)上,以允許通過穿過適當(dāng)?shù)挠H和柱而容易地純化。還可以使用諸如蛋白水解、核磁共振和x射線晶體學(xué)的技術(shù)用物理方法表征分離的蛋白質(zhì)。